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地址:上海市松江區(qū)曹農(nóng)路5弄40號(hào)研磨儀搭配植物RNA快速提取試劑盒提取雞肉組織總RNA
一 、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>快速提取動(dòng)物組織中的總RNA(18S,28S;離心吸附柱不吸附5S)
二 、實(shí)驗(yàn)器材及試劑:研磨儀,離心管,移液槍?zhuān)娪静勰z成像等;無(wú)水乙醇,液氮,瓊脂糖。
三、 實(shí)驗(yàn)材料:雞肉組織。
四、 實(shí)驗(yàn)步驟
1)雞肉組織
2)鮮組織用解剖刀迅速切成小碎離心管中,加入小號(hào)研磨珠,將管子蓋嚴(yán)后放入液氮中冷凍 ,設(shè)置參數(shù),點(diǎn)擊運(yùn)行即可開(kāi)始研磨。
3)取適量組織細(xì)粉轉(zhuǎn)入裝有組織裂解液RLT的離心管中, 用手劇烈振蕩若干秒,充分裂解。用帶鈍針頭的一次性注射器抽打裂解物若干次或直到得到滿(mǎn)意勻漿結(jié)果(或者電動(dòng)勻漿若干秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高產(chǎn)量。
4)將勻漿后裂解物離心,沉淀可能存在的裂解困難的碎片或者不溶物, 將裂解物上清小心轉(zhuǎn)到一個(gè)新離心管。
5)接操作步驟項(xiàng)下3。
6)較精確估計(jì)裂解物(上清)體積,加入等體積的乙醇(請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!),此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀,但是不影響提取過(guò)程,立即吹打混勻,不要離心。
7)立刻將混合物加入一個(gè)吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)離心60秒,棄掉廢液。
8)加去蛋白液RW1,室溫放置幾秒,離心30秒,棄掉廢液。
9)如果DNA殘留明顯,可在加入RW1后室溫放置幾分鐘再離心。
10)加入漂洗液RW(請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!),離心30秒,棄掉廢液。加入漂洗液RW,重復(fù)一遍。
11)將吸附柱RA放回空收集管中離心2分鐘,盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
12)取出吸附柱RA,放入一個(gè)RNase free離心管中,根據(jù)預(yù)期RNA產(chǎn)量在吸附膜的中間部位加30-50μl RNase free water, 室溫放置1分鐘,離心1分鐘。
13)如果預(yù)期RNA產(chǎn)量>30μg,加30-50μl RNase free water重復(fù)步驟8, 合并兩次洗脫液,或者使用第一次的洗脫液加回到吸附柱重復(fù)步驟一遍(如果需要RNA濃度高)。
14)洗脫兩遍的RNA洗脫液濃度高,分兩次洗脫合并洗脫液的RNA產(chǎn)量比前者高15–30%,但是濃度要低,用戶(hù)根據(jù)需要選擇。
五 、實(shí)驗(yàn)結(jié)果:提取的雞肉組織RNA點(diǎn)樣量為1ul,雞肉組織RNA兩個(gè)條帶亮度相當(dāng),提示出現(xiàn)降解。
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